-
Tłoczony na zimno organiczny olej jojoba Olejek nośny z nasion jojoba do masażu pielęgnacyjnego skóry
Głównymi składnikami naturalnego olejku jojoba są kwas palmitynowy, kwas erukowy, kwas oleinowy i kwas gadolowy. Olej jojoba jest również bogaty w witaminy, takie jak witamina E i kompleks witamin z grupy B.
Płynny wosk roślinny z rośliny Jojoba ma złoty kolor. Ziołowy olejek jojoba ma charakterystyczny orzechowy aromat i jest preferowanym dodatkiem do produktów higieny osobistej, takich jak kremy, produkty do makijażu, szampony itp. Ziołowy olejek jojoba można stosować bezpośrednio na skórę w przypadku oparzeń słonecznych, łuszczycy i trądziku. Czysty olej jojoba również wspomaga wzrost włosów.
-
Naturalny, organiczny olejek eteryczny z lawendy do aromaterapeutycznej pielęgnacji skóry
Metoda ekstrakcji lub przetwarzania: Destylacja parowa
Destylacja Część ekstrakcyjna: Kwiat
Pochodzenie kraju: Chiny
Zastosowanie: Rozproszenie/aromaterapia/masaż
Okres przydatności do spożycia: 3 lata
Usługa niestandardowa: niestandardowa etykieta i pudełko lub jako Twoje wymaganie
Certyfikacja:GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% czysty naturalny organiczny olejek eteryczny Magnoliae Officmalis Cortex do pielęgnacji skóry
Zapach Hou Po jest natychmiast gorzki i ostro ostry, a następnie stopniowo otwiera się głęboką, syropową słodyczą i ciepłem.
Hou Po ma powinowactwo do elementów Ziemi i Metalu, gdzie jego gorzkie ciepło działa silnie, opuszczając Qi i suchą wilgoć. Ze względu na te właściwości stosowany jest w medycynie chińskiej w celu łagodzenia zastoju i gromadzenia się substancji w przewodzie pokarmowym, a także kaszlu i świszczącego oddechu spowodowanego flegmą zatykającą płuca.
Magnolia Officinials to drzewo liściaste występujące w górach i dolinach Syczuanu, Hubei i innych prowincji Chin. Wysoce aromatyczna kora stosowana w tradycyjnej medycynie chińskiej jest usuwana z łodyg, gałęzi i korzeni. Zbierana jest od kwietnia do czerwca. Gęsta, gładka kora, ciężka od oleju, ma fioletowawą barwę od wewnętrznej strony i krystaliczny połysk.
Praktycy mogą rozważyć połączenie Hou Po z olejkiem eterycznym Qing Pi jako najwyższe uzupełnienie mieszanek mających na celu rozbicie nagromadzeń.
-
Pakiet niestandardowy OEM Naturalny olej z kłącza Macrocephalae
Jako skuteczny środek chemioterapeutyczny, 5-fluorouracyl (5-FU) znajduje szerokie zastosowanie w leczeniu nowotworów złośliwych przewodu pokarmowego, głowy, szyi, klatki piersiowej i jajnika. A 5-FU jest lekiem pierwszego rzutu w leczeniu raka jelita grubego w praktyce klinicznej. Mechanizm działania 5-FU polega na blokowaniu transformacji kwasu nukleinowego uracylu do kwasu nukleinowego tyminy w komórkach nowotworowych, a następnie wpływaniu na syntezę i naprawę DNA i RNA w celu osiągnięcia efektu cytotoksycznego (Afzal i in., 2009; Ducreux i in. in., 2015; Longley i in., 2003). Jednakże 5-FU powoduje również biegunkę wywołaną chemioterapią (CID), jedną z najczęstszych reakcji niepożądanych, która nęka wielu pacjentów (Filho i in., 2016). Częstość występowania biegunki u pacjentów leczonych 5-FU sięgała 50–80%, co poważnie wpływało na przebieg i skuteczność chemioterapii (Iacovelli i in., 2014; Rosenoff i in., 2006). W związku z tym istotne znaczenie ma znalezienie skutecznej terapii CID wywołanego 5-FU.
Obecnie do klinicznego leczenia CID wprowadzono interwencje nielekowe i interwencje lekowe. Interwencje nielekowe obejmują rozsądną dietę i suplementację solą, cukrem i innymi składnikami odżywczymi. Leki takie jak loperamid i oktreotyd są powszechnie stosowane w terapii przeciwbiegunkowej CID (Benson i in., 2004). Ponadto w różnych krajach do leczenia CID stosuje się również etnomedycynę za pomocą własnej, unikalnej terapii. Tradycyjna medycyna chińska (TCM) to typowa etnomedycyna praktykowana od ponad 2000 lat w krajach Azji Wschodniej, w tym w Chinach, Japonii i Korei (Qi i in., 2010). TCM utrzymuje, że leki chemioterapeutyczne mogą powodować zużycie Qi, niedobór śledziony, dysharmonię w żołądku i endofityczną wilgoć, co skutkuje dysfunkcją przewodzenia jelit. W teorii TCM strategia leczenia CID powinna opierać się głównie na uzupełnianiu Qi i wzmacnianiu śledziony (Wang i in., 1994).
Suszone korzenieAtractylodes makrocefalaKoidz. (AM) iŻeń-szeń PanaxKalifornia Mey. (PG) to typowe leki ziołowe w TCM o takim samym działaniu, jak uzupełnienie Qi i wzmocnienie śledziony (Li i in., 2014). AM i PG są zwykle używane jako para ziół (najprostsza forma zgodności chińskich ziół) z efektem uzupełniania Qi i wzmacniania śledziony w leczeniu biegunki. Na przykład AM i PG zostały udokumentowane w klasycznych formułach przeciwbiegunkowych, takich jak Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang zTaiping Huimin Heji Ju Fang(dynastia Song, Chiny) i Bu Zhong Yi Qi Tang zPi Wei Lun(dynastia Yuan, Chiny) (ryc. 1). Kilka wcześniejszych badań wykazało, że wszystkie trzy formuły mają zdolność łagodzenia CID (Bai i in., 2017; Chen i in., 2019; Gou i in., 2016). Ponadto nasze poprzednie badanie wykazało, że kapsułka Shenzhu zawierająca wyłącznie AM i PG ma potencjalny wpływ na leczenie biegunki, zapalenia okrężnicy (zespół xexie) i innych chorób żołądkowo-jelitowych (Feng i in., 2018). Jednakże w żadnym badaniu nie omówiono wpływu i mechanizmu AM i PG w leczeniu CID, czy to w skojarzeniu, czy osobno.
Obecnie uważa się, że mikroflora jelitowa jest potencjalnym czynnikiem pozwalającym zrozumieć mechanizm terapeutyczny TCM (Feng i in., 2019). Współczesne badania wskazują, że mikroflora jelitowa odgrywa kluczową rolę w utrzymaniu homeostazy jelitowej. Zdrowa mikroflora jelitowa przyczynia się do ochrony błony śluzowej jelit, metabolizmu, homeostazy i odpowiedzi immunologicznej oraz supresji patogenów (Thursby i Juge, 2017; Pickard i in., 2017). Zaburzona mikroflora jelitowa bezpośrednio lub pośrednio upośledza funkcje fizjologiczne i odpornościowe organizmu człowieka, wywołując reakcje uboczne, takie jak biegunka (Patel i in., 2016; Zhao i Shen, 2010). Badania wykazały, że 5-FU znacząco zmienia strukturę mikroflory jelitowej u myszy z biegunką (Li i in., 2017). Zatem wpływ AM i PM na biegunkę wywołaną 5-FU może zależeć od mikroflory jelitowej. Jednakże nadal nie wiadomo, czy AM i PG same i w połączeniu mogą zapobiegać biegunce wywołanej 5-FU poprzez modulację mikroflory jelitowej.
Aby zbadać działanie przeciwbiegunkowe i mechanizm leżący u podstaw AM i PG, użyliśmy 5-FU do symulacji modelu biegunki u myszy. Tutaj skupiliśmy się na potencjalnych skutkach pojedynczego i łączonego podawania (AP).Atractylodes makrocefalaolejek eteryczny (AMO) iŻeń-szeń Panaxcałkowite saponiny (PGS), aktywne składniki odpowiednio ekstrahowane z AM i PG, na biegunkę, patologię jelit i strukturę drobnoustrojów po chemioterapii 5-FU.
-
100% czysty naturalny olejek eteryczny Eucommiae Foliuml do pielęgnacji skóry
Eucommia ulmoides(UE) (powszechnie nazywany w języku chińskim „Du Zhong”) należą do rodziny Eucommiaceae, rodzaju małego drzewa występującego w środkowych Chinach [1] Roślina ta jest szeroko uprawiana w Chinach na dużą skalę ze względu na jej znaczenie lecznicze. Z UE wyizolowano około 112 związków, w tym lignany, irydoidy, fenole, steroidy i inne związki. Uzupełniająca formuła ziół tej rośliny (np. pysznej herbaty) wykazała pewne właściwości lecznicze. Liść UE ma wyższą aktywność związaną z korą, kwiatem i owocami [2,3] Donoszono, że liście UE wzmacniają siłę kości i mięśnie ciała [4], prowadząc w ten sposób do długowieczności i promując płodność u ludzi [5] Stwierdzono, że pyszna formuła herbaty sporządzona z liści UE zmniejsza otłuszczenie i poprawia metabolizm energetyczny. Doniesiono, że związki flawonoidowe (takie jak rutyna, kwas chlorogenowy, kwas ferulowy i kwas kawowy) wykazują działanie przeciwutleniające w liściach UE [6].
Chociaż istnieje wystarczająca literatura na temat właściwości fitochemicznych UE, istnieje niewiele badań na temat właściwości farmakologicznych różnych związków ekstrahowanych z kory, nasion, łodyg i liści UE. W tym artykule przeglądowym wyjaśnione zostaną szczegółowe informacje dotyczące różnych związków ekstrahowanych z różnych części (kory, nasion, łodygi i liści) UE oraz potencjalne zastosowania tych związków we właściwościach prozdrowotnych, w oparciu o dowody naukowe, stanowiąc w ten sposób materiał referencyjny do stosowania UE.
-
Czysty naturalny olejek Houttuynia cordata Olejek Houttuynia Cordata Olejek Lchthammolum
W większości krajów rozwijających się 70-95% populacji w ramach podstawowej opieki zdrowotnej korzysta z tradycyjnych leków, a spośród tych 85% ludzi wykorzystuje rośliny lub ich ekstrakty jako substancje czynne.[1] Poszukiwanie nowych biologicznie aktywnych związków z roślin zwykle zależy od konkretnych informacji etnicznych i ludowych uzyskanych od lokalnych praktyków i nadal jest uważane za ważne źródło odkrywania leków. W Indiach około 2000 leków jest pochodzenia roślinnego.[2] Ze względu na szerokie zainteresowanie wykorzystaniem roślin leczniczych, niniejszy przegląd ntHouttuynia cordataThunb. dostarcza aktualnych informacji w odniesieniu do pojawiających się w literaturze badań botanicznych, handlowych, etnofarmakologicznych, fitochemicznych i farmakologicznych.H. cordataThunb. należy do rodzinySaururowatei jest powszechnie znany jako ogon chińskiej jaszczurki. Jest to bylina zielna z kłączem rozłogowym, posiadająca dwa różne chemotypy.3,4] Chiński chemotyp gatunku występuje w warunkach dzikich i półdzikich w północno-wschodnich Indiach od kwietnia do września.[5,6,7]H. cordatajest dostępny w Indiach, zwłaszcza w dolinie Brahmaputra w stanie Assam i jest tradycyjnie wykorzystywany przez różne plemiona Assamu w postaci warzyw, a także do różnych celów leczniczych.
-
Producent olejku 100% PureArctium lappa – Natural Lime Arctium lappa olej z Certyfikatami Zapewnienia Jakości
Korzyści zdrowotne
Korzeń łopianu jest często spożywany, ale można go również suszyć i maczać w herbacie. Świetnie sprawdza się jako źródło inuliny, m.inprebiotykbłonnik, który wspomaga trawienie i poprawia zdrowie jelit. Dodatkowo korzeń ten zawiera flawonoidy (składniki odżywcze roślin),fitochemikaliaoraz przeciwutleniacze, o których wiadomo, że mają korzyści zdrowotne.
Ponadto korzeń łopianu może zapewnić inne korzyści, takie jak:
Zmniejsz przewlekłe zapalenie Korzeń łopianu zawiera szereg przeciwutleniaczy, takich jak kwercetyna, kwasy fenolowe i luteolina, które mogą pomóc chronić komórki przedwolne rodniki. Te przeciwutleniacze pomagają zmniejszyć stan zapalny w całym organizmie.
Zagrożenia dla zdrowia
Korzeń łopianu jest uważany za bezpieczny do jedzenia i picia jako herbata. Jednak roślina ta bardzo przypomina rośliny psiankowate, które są toksyczne. Zaleca się kupowanie korzenia łopianu wyłącznie od zaufanych sprzedawców i powstrzymanie się od samodzielnego zbierania go. Ponadto istnieje niewiele informacji na temat jego wpływu na dzieci i kobiety w ciąży. Przed zastosowaniem korzenia łopianu u dzieci lub jeśli jesteś w ciąży, porozmawiaj ze swoim lekarzem.
Oto kilka innych możliwych zagrożeń dla zdrowia, które należy wziąć pod uwagę przy stosowaniu korzenia łopianu:
Zwiększone odwodnienie
Korzeń łopianu działa jak naturalny środek moczopędny, co może prowadzić do odwodnienia. Jeśli bierzesz pigułki na wodę lub inne leki moczopędne, nie powinieneś brać korzenia łopianu. Jeśli zażywasz te leki, ważne jest, aby mieć świadomość innych leków, ziół i składników, które mogą prowadzić do odwodnienia.
Reakcja alergiczna
Jeśli jesteś wrażliwy lub masz w przeszłości reakcje alergiczne na stokrotki, ambrozję lub chryzantemy, jesteś narażony na zwiększone ryzyko reakcji alergicznej na korzeń łopianu.
-
Hurtowa cena hurtowa 100% czysty olejek AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromaterapia Eucalyptus globulus
W badaniach na zwierzętach i in vitro sprawdzano potencjalne działanie przeciwgrzybicze, przeciwzapalne i sercowo-naczyniowe sasafrasu i jego składników. Brakuje jednak badań klinicznych, a sasafras nie jest uważany za bezpieczny w użyciu. Safrol, główny składnik kory korzenia i olejku sasafrasu, został zakazany przez amerykańską Agencję ds. Żywności i Leków (FDA), w tym do stosowania jako środek aromatyzujący lub zapachowy, i nie powinien być stosowany wewnętrznie ani zewnętrznie, ponieważ jest potencjalnie rakotwórczy. Safrol był wykorzystywany do nielegalnej produkcji 3,4-metylenodioksymetamfetaminy (MDMA), znanej również pod nazwami handlowymi „ecstasy” lub „Molly”, a sprzedaż safrolu i oleju sasafrasowego jest monitorowana przez amerykańską Agencję ds. Walki z Narkotykami
-
Hurtowa cena hurtowa 100% czysty olejek eteryczny Stellariae Radix (nowy) Relaks Aromaterapia Eucalyptus globulus
Farmakopea Chińska (wydanie 2020) wymaga, aby ekstrakt metanolowy YCH nie był mniejszy niż 20,0% [2], bez określenia innych wskaźników oceny jakości. Wyniki tego badania pokazują, że zawartość ekstraktów metanolowych w próbkach dzikich i uprawnych spełniała standardy farmakopei i nie było między nimi istotnej różnicy. W związku z tym, według tego wskaźnika, nie było widocznej różnicy w jakości pomiędzy próbkami dzikimi i uprawnymi. Jednakże zawartość steroli ogółem i flawonoidów ogółem w próbkach dzikich była znacznie wyższa niż w próbkach uprawianych. Dalsza analiza metabolomiczna ujawniła dużą różnorodność metabolitów pomiędzy próbkami dzikimi i uprawnymi. Dodatkowo przebadano 97 znacząco różnych metabolitów, które wymieniono wTabela uzupełniająca S2. Do tych znacząco różnych metabolitów należą β-sitosterol (ID to M397T42) i pochodne kwercetyny (M447T204_2), które według doniesień są składnikami aktywnymi. Do metabolitów różnicowych zaliczały się także wcześniej niezgłaszane składniki, takie jak trygonellina (M138T291_2), betaina (M118T277_2), fustyna (M269T36), rotenon (M241T189), arctiina (M557T165) i kwas loganowy (M399T284_2). Składniki te odgrywają różne role w działaniu przeciwutleniającym, przeciwzapalnym, usuwaniu wolnych rodników, działaniu przeciwnowotworowym i leczeniu miażdżycy, a zatem mogą stanowić domniemane nowe aktywne składniki YCH. Zawartość składników aktywnych decyduje o skuteczności i jakości materiałów leczniczych [7] Podsumowując, ekstrakt metanolowy jako jedyny wskaźnik oceny jakości YCH ma pewne ograniczenia i należy dokładniej zbadać bardziej szczegółowe markery jakości. Wystąpiły znaczące różnice w całkowitych sterolach, całkowitych flawonoidach i zawartości wielu innych różnicowych metabolitów pomiędzy dzikim i uprawianym YCH; więc potencjalnie istniały między nimi pewne różnice w jakości. Jednocześnie nowo odkryte potencjalne składniki aktywne YCH mogą mieć ważną wartość referencyjną dla badania podstaw funkcjonalnych YCH i dalszego rozwoju zasobów YCH.
Znaczenie oryginalnych materiałów leczniczych zostało od dawna uznane w konkretnym regionie pochodzenia przy produkcji chińskich leków ziołowych doskonałej jakości [8] Wysoka jakość jest istotną cechą oryginalnych materiałów leczniczych, a siedlisko jest ważnym czynnikiem wpływającym na jakość tych materiałów. Odkąd YCH zaczęto stosować jako lekarstwo, od dawna jest ono zdominowane przez dzikie YCH. Po pomyślnym wprowadzeniu i udomowieniu YCH w Ningxia w latach 80. XX wieku, źródło materiałów leczniczych Yinchaihu stopniowo przeniosło się z YCH dzikiego na uprawiane. Zgodnie z poprzednim dochodzeniem dotyczącym źródeł YCH [9] i badania terenowe naszej grupy badawczej, istnieją znaczne różnice w obszarach dystrybucji uprawnych i dzikich materiałów leczniczych. Dziki YCH występuje głównie w Regionie Autonomicznym Ningxia Hui w prowincji Shaanxi, w sąsiedztwie suchej strefy Mongolii Wewnętrznej i środkowej Ningxia. W szczególności pustynny step na tych obszarach jest najbardziej odpowiednim siedliskiem dla wzrostu YCH. Natomiast uprawiany YCH występuje głównie na południe od dzikiego obszaru występowania, na przykład w hrabstwie Tongxin (uprawa I) i jego okolicach, które stało się największą bazą upraw i produkcji w Chinach, oraz w hrabstwie Pengyang (uprawa II). , które znajduje się w bardziej południowej części i jest kolejnym obszarem produkcji YCH. Co więcej, siedliska powyższych dwóch obszarów uprawnych nie są stepami pustynnymi. Dlatego oprócz sposobu produkcji istnieją również znaczne różnice w siedlisku YCH dzikiego i uprawianego. Siedlisko jest ważnym czynnikiem wpływającym na jakość ziołowych materiałów leczniczych. Różne siedliska będą miały wpływ na powstawanie i akumulację metabolitów wtórnych w roślinach, wpływając w ten sposób na jakość produktów leczniczych [10,11] Dlatego znaczące różnice w zawartości całkowitych flawonoidów i całkowitych steroli oraz ekspresji 53 metabolitów, które odkryliśmy w tym badaniu, mogą wynikać z zarządzania terenem i różnic w siedliskach.Jednym z głównych sposobów, w jaki środowisko wpływa na jakość materiałów leczniczych, jest wywieranie stresu na rośliny źródłowe. Umiarkowany stres środowiskowy ma tendencję do stymulowania akumulacji metabolitów wtórnych [12,13] Hipoteza równowagi wzrostu/różnicowania stwierdza, że przy wystarczającej podaży składników odżywczych rośliny przede wszystkim rosną, natomiast przy niedoborze składników odżywczych rośliny głównie różnicują się i wytwarzają więcej metabolitów wtórnych [14] Stres suszy spowodowany niedoborem wody jest głównym stresem środowiskowym, na jaki narażone są rośliny na obszarach suchych. W tym badaniu stan wody w uprawianym YCH jest bardziej obfity, a roczny poziom opadów jest znacznie wyższy niż w przypadku dzikiego YCH (zaopatrzenie w wodę dla uprawianego YCH było około 2 razy większe niż w przypadku dzikiego; uprawianego II było około 3,5 razy większe niż w przypadku dzikiego YCH) ). Ponadto gleba w dzikim środowisku jest glebą piaszczystą, ale gleba na polach uprawnych jest glebą gliniastą. W porównaniu z gliną, gleba piaszczysta ma słabą zdolność zatrzymywania wody i jest bardziej podatna na nasilenie stresu suszy. Jednocześnie uprawie często towarzyszyło podlewanie, dzięki czemu stopień stresu suszy był niewielki. Dziki YCH rośnie w trudnych, naturalnych, suchych siedliskach i dlatego może cierpieć z powodu poważniejszego stresu związanego z suszą.Osmoregulacja jest ważnym mechanizmem fizjologicznym, dzięki któremu rośliny radzą sobie ze stresem suszy, a alkaloidy są ważnymi regulatorami osmotycznymi u roślin wyższych.15] Betainy są rozpuszczalnymi w wodzie alkaloidami czwartorzędowymi związkami amoniowymi i mogą działać jako osmoprotektanty. Stres suszy może zmniejszać potencjał osmotyczny komórek, natomiast osmoprotektanty chronią i utrzymują strukturę i integralność makrocząsteczek biologicznych oraz skutecznie łagodzą szkody wyrządzone roślinom przez stres suszy.16] Na przykład pod wpływem stresu suszy zawartość betainy w burakach cukrowych i Lycium barbarum znacznie wzrosła [17,18] Trygonellina jest regulatorem wzrostu komórek, a w warunkach stresu suszy może wydłużać cykl komórkowy roślin, hamować wzrost komórek i prowadzić do kurczenia się objętości komórek. Względny wzrost stężenia substancji rozpuszczonej w komórce umożliwia roślinie osiągnięcie regulacji osmotycznej i zwiększenie jej odporności na stres suszy [19] JIA X [20] odkryli, że wraz ze wzrostem stresu suszy Astragalus membranaceus (źródło tradycyjnej medycyny chińskiej) wytwarzał więcej trygoneliny, która reguluje potencjał osmotyczny i poprawia zdolność przeciwstawiania się stresowi suszy. Wykazano również, że flawonoidy odgrywają ważną rolę w odporności roślin na stres suszy [21,22] Duża liczba badań potwierdziła, że umiarkowany stres suszy sprzyjał akumulacji flawonoidów. Lang Duo-Yong i in. [23] porównali wpływ stresu suszy na YCH poprzez kontrolowanie zdolności zatrzymywania wody na polu. Stwierdzono, że stres suszy w pewnym stopniu hamował wzrost korzeni, natomiast w przypadku umiarkowanego i silnego stresu suszy (40% pojemności wodnej pola) całkowita zawartość flawonoidów w YCH wzrosła. Tymczasem w warunkach stresu suszy fitosterole mogą regulować płynność i przepuszczalność błon komórkowych, hamować utratę wody i poprawiać odporność na stres.24,25] Dlatego zwiększona akumulacja całkowitych flawonoidów, całkowitych steroli, betainy, trygoneliny i innych metabolitów wtórnych w dzikim YCH może być związana ze stresem suszy o wysokiej intensywności.W tym badaniu przeprowadzono analizę wzbogacenia szlaku KEGG na metabolitach, które okazały się znacząco różnić między dzikim i uprawianym YCH. Wzbogacone metabolity obejmowały te zaangażowane w szlaki metabolizmu askorbinianu i aldaranu, biosyntezę aminoacylo-tRNA, metabolizm histydyny i metabolizm beta-alaniny. Te szlaki metaboliczne są ściśle powiązane z mechanizmami odporności roślin na stres. Wśród nich metabolizm askorbinianu odgrywa ważną rolę w produkcji przeciwutleniaczy roślin, metabolizmie węgla i azotu, odporności na stres i innych funkcjach fizjologicznych.26]; Biosynteza aminoacylo-tRNA jest ważnym szlakiem tworzenia białek [27,28], który bierze udział w syntezie białek odpornych na stres. Zarówno szlaki histydynowe, jak i β-alaniny mogą zwiększać tolerancję roślin na stres środowiskowy [29,30] To dodatkowo wskazuje, że różnice w metabolitach pomiędzy dzikim i uprawianym YCH były ściśle powiązane z procesami odporności na stres.Gleba jest materialną podstawą wzrostu i rozwoju roślin leczniczych. Azot (N), fosfor (P) i potas (K) w glebie są ważnymi składnikami odżywczymi dla wzrostu i rozwoju roślin. Materia organiczna gleby zawiera także N, P, K, Zn, Ca, Mg oraz inne makroelementy i pierwiastki śladowe niezbędne roślinom leczniczym. Nadmiar lub niedobór składników odżywczych lub niezrównoważone proporcje składników odżywczych będą miały wpływ na wzrost i rozwój oraz jakość materiałów leczniczych, a różne rośliny mają różne wymagania dotyczące składników odżywczych [31,32,33] Na przykład niski stres N sprzyjał syntezie alkaloidów w Isatis indigotica i był korzystny dla akumulacji flawonoidów w roślinach takich jak Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge i Dichondra repens Forst. Natomiast zbyt duża ilość N hamowała akumulację flawonoidów u gatunków takich jak Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis i Ginkgo biloba oraz wpływała na jakość materiałów leczniczych [34] Zastosowanie nawozu P skutecznie zwiększyło zawartość kwasu lukrecjowego i dihydroacetonu w lukrecji uralskiej [35] Gdy zastosowana ilość przekroczyła 0,12 kg·m−2, całkowita zawartość flawonoidów w Tussilago farfara spadła [36] Zastosowanie nawozu P miało negatywny wpływ na zawartość polisacharydów w rhizoma Polygonati tradycyjnej medycyny chińskiej [37], ale nawóz K skutecznie zwiększał zawartość saponin [38] Zastosowanie nawozu w ilości 450 kg·hm−2 K było najlepsze dla wzrostu i akumulacji saponin dwuletniego Panax notoginseng [39] Przy stosunku N:P:K = 2:2:1 sumaryczne ilości ekstraktu hydrotermalnego, harpagidu i harpagozydu były największe [40] Wysoki stosunek N, P i K sprzyjał wzrostowi Pogostemon cablin i zwiększał zawartość olejku lotnego. Niski stosunek N, P i K zwiększa zawartość głównych skutecznych składników olejku z liści łodygi kabliny Pogostemon [41] YCH jest rośliną tolerującą jałową glebę i może mieć szczególne wymagania w zakresie składników odżywczych, takich jak N, P i K. W tym badaniu, w porównaniu z YCH uprawnym, gleba dzikich roślin YCH była stosunkowo jałowa: zawartość gleby materii organicznej, całkowity N, całkowity P i całkowity K wynosiły odpowiednio około 1/10, 1/2, 1/3 i 1/3 wartości dla roślin uprawnych. Dlatego różnice w składnikach odżywczych w glebie mogą być kolejną przyczyną różnic między metabolitami wykrytymi w YCH uprawnym i dzikim. Weibao Ma i in. [42] stwierdzili, że zastosowanie określonej ilości nawozu N i P znacząco poprawiło plon i jakość nasion. Jednakże wpływ składników odżywczych na jakość YCH nie jest jasny, a środki nawożenia mające na celu poprawę jakości materiałów leczniczych wymagają dalszych badań.Chińskie leki ziołowe charakteryzują się tym, że „korzystne siedliska sprzyjają plonom, a niekorzystne siedliska poprawiają jakość” [43] W procesie stopniowego przechodzenia z dzikiego na uprawny YCH, siedlisko roślin zmieniło się z jałowego i jałowego pustynnego stepu w żyzne pola uprawne z większą obfitością wody. Siedlisko uprawianego YCH jest lepsze, a plony wyższe, co pomaga zaspokoić popyt rynkowy. Jednak to doskonałe siedlisko doprowadziło do znaczących zmian w metabolitach YCH; dalsze badania będą wymagały tego, czy sprzyja to poprawie jakości YCH i jak osiągnąć wysokiej jakości produkcję YCH za pomocą środków uprawy opartych na podstawach naukowych.Symulacyjna uprawa siedlisk to metoda symulowania warunków siedliskowych i środowiskowych dzikich roślin leczniczych, oparta na wiedzy na temat długoterminowej adaptacji roślin do określonych stresów środowiskowych [43] Symulując różne czynniki środowiskowe, które wpływają na dzikie rośliny, zwłaszcza pierwotne siedliska roślin wykorzystywane jako źródła autentycznych materiałów leczniczych, podejście to wykorzystuje projekt naukowy i innowacyjną interwencję człowieka w celu zrównoważenia wzrostu i wtórnego metabolizmu chińskich roślin leczniczych [43] Metody te mają na celu osiągnięcie optymalnych ustaleń w celu opracowania wysokiej jakości materiałów leczniczych. Symulacyjna uprawa siedlisk powinna zapewnić skuteczny sposób produkcji wysokiej jakości YCH, nawet jeśli podstawy farmakodynamiczne, markery jakości i mechanizmy reakcji na czynniki środowiskowe są niejasne. W związku z tym sugerujemy, że projekty naukowe i środki zarządzania terenem w uprawie i produkcji YCH powinny być przeprowadzane w odniesieniu do cech środowiskowych dzikiego YCH, takich jak suche, jałowe i piaszczyste warunki glebowe. Jednocześnie oczekuje się, że badacze przeprowadzą bardziej szczegółowe badania nad funkcjonalnymi podstawami materiałowymi i markerami jakości YCH. Badania te mogą zapewnić skuteczniejsze kryteria oceny YCH oraz promować produkcję wysokiej jakości i zrównoważony rozwój branży. -
Ziołowy olejek Fructus Amomi Naturalny masaż Dyfuzory 1kg luzem Amomum villosum Olejek eteryczny
Rodzina Zingiberaceae przyciąga coraz większą uwagę w badaniach allelopatycznych ze względu na bogatą zawartość olejków eterycznych i aromatyczność należących do niej gatunków. Poprzednie badania wykazały, że substancje chemiczne zawarte w kurkumie zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] i Zingiber officinale Rosc. [42] z rodziny imbirowatych mają działanie allelopatyczne na kiełkowanie nasion i wzrost sadzonek kukurydzy, sałaty i pomidorów. Nasze obecne badanie jest pierwszym raportem na temat allelopatycznego działania substancji lotnych z łodyg, liści i młodych owoców A. villosum (członka rodziny Zingiberaceae). Wydajność olejku z łodyg, liści i młodych owoców wynosiła odpowiednio 0,15%, 0,40% i 0,50%, co wskazuje, że owoce wytwarzały większą ilość olejków eterycznych niż łodygi i liście. Głównymi składnikami olejków eterycznych z łodyg były β-pinen, β-fellandren i α-pinen, co przypominało działanie głównych substancji chemicznych olejku z liści, β-pinenu i α-pinenu (węglowodory monoterpenowe). Z drugiej strony olej z młodych owoców był bogaty w octan Bornylu i kamforę (utlenione monoterpeny). Wyniki zostały poparte odkryciami Do N Dai [30,32] i Hui Ao [31], który zidentyfikował olejki z różnych organów A. villosum.
Istnieje kilka doniesień na temat działania tych głównych związków hamującego wzrost roślin u innych gatunków. Shalinder Kaur odkryła, że α-pinen z eukaliptusa wyraźnie zmniejsza długość korzenia i wysokość pędu Amaranthus viridis L. przy stężeniu 1,0 µl [43], a inne badanie wykazało, że α-pinen hamuje wczesny wzrost korzeni i powoduje uszkodzenia oksydacyjne w tkance korzenia poprzez zwiększone wytwarzanie reaktywnych form tlenu [44] W niektórych doniesieniach argumentowano, że β-pinen hamuje kiełkowanie i wzrost sadzonek badanych chwastów w sposób zależny od dawki, poprzez zakłócanie integralności błony [45], zmieniając biochemię roślin i wzmacniając aktywność peroksydaz i oksydaz polifenolowych [46] β-Phellandrene wykazywał maksymalne hamowanie kiełkowania i wzrostu Vigna unguiculata (L.) Walp w stężeniu 600 ppm [47], natomiast w stężeniu 250 mg/m3 kamfora hamowała wzrost korzeni i pędów Lepidium sativum L. [48] Jednak badania opisujące allelopatyczny wpływ octanu Bornylu są skąpe. W naszym badaniu allelopatyczny wpływ β-pinenu, octanu Bornylu i kamfory na długość korzenia był słabszy niż w przypadku olejków lotnych z wyjątkiem α-pinenu, natomiast bogaty w α-pinen olejek liściowy był również bardziej fitotoksyczny niż odpowiadające mu olejki lotne olejki z łodyg i owoców A. villosum, oba odkrycia wskazują, że α-pinen może być ważną substancją chemiczną wywołującą allelopatię u tego gatunku. Jednocześnie wyniki sugerują również, że niektóre związki zawarte w oleju owocowym, których nie występuje w dużych ilościach, mogą przyczyniać się do wywoływania efektu fitotoksycznego, co wymaga dalszych badań w przyszłości.W normalnych warunkach działanie allelopatyczne środków allelochemicznych jest specyficzne gatunkowo. Jiang i in. odkryli, że olejek eteryczny wytwarzany przez Artemisia sieversiana wywierał silniejszy wpływ na Amaranthus retroflexus L. niż na Medicago sativa L., Poa annua L. i Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49] W innym badaniu olejek eteryczny z Lavandula angustifolia Mill. powodowały różny stopień działania fitotoksycznego na różne gatunki roślin. Lolium multiflorum Lam. był najbardziej wrażliwym gatunkiem akceptorowym, wzrost hipokotylu i korzonków został zahamowany odpowiednio o 87,8% i 76,7% przy dawce 1 μL/ml olejku, natomiast wzrost hipokotylu sadzonek ogórka był ledwie zahamowany [20] Nasze wyniki pokazały również, że istniała różnica w wrażliwości na substancje lotne A. villosum pomiędzy L. sativa i L. perenne.Lotne związki i olejki eteryczne tego samego gatunku mogą różnić się ilościowo i/lub jakościowo ze względu na warunki wzrostu, części roślin i metody wykrywania. Przykładowo w raporcie wykazano, że głównymi związkami substancji lotnych emitowanych z liści Sambucus nigra są piranoid (10,3%) i β-kariofilen (6,6%), natomiast benzaldehyd (17,8%), α-bulnezen (16,6%) i tetrakosan (11,5%) obfitowały w olejki ekstrahowane z liści [50] W naszym badaniu lotne związki uwalniane przez świeże materiały roślinne miały silniejsze działanie allelopatyczne na rośliny testowe niż wyekstrahowane olejki eteryczne, a różnice w odpowiedzi były ściśle związane z różnicami w allelochemikaliach obecnych w obu preparatach. Dokładne różnice między związkami lotnymi a olejami wymagają dalszych badań w kolejnych eksperymentach.Różnice w różnorodności drobnoustrojów i strukturze zbiorowisk drobnoustrojów w próbkach gleby, do których dodano olejki lotne, były związane z konkurencją między mikroorganizmami, a także wszelkimi efektami toksycznymi i czasem przebywania olejków lotnych w glebie. Vokou i Liotiri [51] odkryli, że odpowiednie zastosowanie czterech olejków eterycznych (0,1 ml) do uprawianej gleby (150 g) aktywowało oddychanie próbek gleby, nawet olejki różniły się składem chemicznym, co sugeruje, że oleje roślinne są wykorzystywane jako źródło węgla i energii przez występujące mikroorganizmy glebowe. Dane uzyskane z przeprowadzonych badań potwierdziły, że olejki z całej rośliny A. villosum przyczyniły się do wyraźnego wzrostu liczebności gatunków grzybów glebowych już 14 dnia po dodaniu oleju, co wskazuje, że olejek ten może stanowić źródło węgla dla większej ilości grzyby glebowe. W innym badaniu przedstawiono następujący wniosek: mikroorganizmy glebowe odzyskały swoje początkowe funkcje i biomasę po przejściowym okresie zmian wywołanych dodatkiem oleju Thymbra capitata L. (Cav), ale oleju w najwyższej dawce (0,93 µl oleju na gram gleby). nie pozwoliły mikroorganizmom glebowym odzyskać pierwotną funkcjonalność [52] W bieżącym badaniu, w oparciu o analizę mikrobiologiczną gleby po zastosowaniu różnych dni i stężeń, spekulowaliśmy, że społeczność bakterii glebowych odrodzi się po większej liczbie dni. Natomiast mikroflora grzybowa nie może powrócić do swojego pierwotnego stanu. Poniższe wyniki potwierdzają tę hipotezę: wyraźny wpływ wysokiego stężenia oleju na skład mikrobiomu grzybów glebowych został ujawniony poprzez analizę głównych współrzędnych (PCoA), a prezentacje map cieplnych ponownie potwierdziły, że skład zbiorowiska grzybów w glebie traktowane 3,0 mg/ml oleju (mianowicie 0,375 mg oleju na gram gleby) na poziomie rodzaju różniły się znacznie od innych zabiegów. Obecnie badania dotyczące wpływu dodatku węglowodorów monoterpenowych lub monoterpenów utlenionych na różnorodność mikrobiologiczną gleby i strukturę zbiorowisk są nadal nieliczne. Kilka badań wykazało, że α-pinen zwiększa aktywność drobnoustrojów w glebie i względną liczebność Methylophilaceae (grupa metylotrofów, Proteobacteria) przy niskiej zawartości wilgoci, odgrywając ważną rolę jako źródło węgla w suchszych glebach [53] Podobnie olejek eteryczny z całej rośliny A. villosum, zawierający 15,03% α-pinenu (Tabela uzupełniająca S1), oczywiście zwiększył względną liczebność Proteobacteria przy 1,5 mg/ml i 3,0 mg/ml, co sugeruje, że α-pinen prawdopodobnie działa jako jedno ze źródeł węgla dla mikroorganizmów glebowych.Lotne związki wytwarzane przez różne narządy A. villosum miały różny stopień działania allelopatycznego na L. sativa i L. perenne, co było ściśle powiązane ze składnikami chemicznymi zawartymi w częściach roślin A. villosum. Chociaż skład chemiczny olejku lotnego został potwierdzony, nieznane są lotne związki uwalniane przez A. villosum w temperaturze pokojowej, które wymagają dalszych badań. Co więcej, warto wziąć pod uwagę efekt synergistyczny pomiędzy różnymi allelochemikaliami. Jeśli chodzi o mikroorganizmy glebowe, aby kompleksowo zbadać wpływ olejku lotnego na mikroorganizmy glebowe, należy jeszcze przeprowadzić bardziej szczegółowe badania: wydłużyć czas leczenia olejkiem lotnym i wykryć różnice w składzie chemicznym olejku lotnego w glebie w różne dni. -
Czysty olejek z Artemisia capillaris do produkcji świec i mydła hurtowy olejek eteryczny z dyfuzorem nowość do dyfuzorów z palnikiem trzcinowym
Projekt modelu gryzonia
Zwierzęta podzielono losowo na pięć grup po piętnaście myszy każda. Myszom z grupy kontrolnej i grupy modelowej podano przez sondęolej sezamowyprzez 6 dni. Myszom z grupy kontroli pozytywnej podano przez sondę tabletki bifendatu (BT, 10 mg/kg) przez 6 dni. Grupom doświadczalnym podawano 100 mg/kg i 50 mg/kg AEO rozpuszczonego w oleju sezamowym przez 6 dni. W dniu 6 grupie kontrolnej podano olej sezamowy, a wszystkim pozostałym grupom pojedynczą dawkę 0,2% CCl4 w oleju sezamowym (10 ml/kg) przezwstrzyknięcie dootrzewnowe. Następnie myszy pozbawiono wody i pobrano próbki krwi z naczyń pozagałkowych; pobraną krew odwirowano przy 3000 ×gprzez 10 minut, aby oddzielić surowicę.Zwichnięcie szyjki macicyprzeprowadzono natychmiast po pobraniu krwi, a próbki wątroby natychmiast pobrano. Jedną część próbki wątroby natychmiast przechowywano w temperaturze -20°C do czasu analizy, a drugą wycięto i utrwalono w 10% roztworzeformalinarozwiązanie; pozostałe tkanki przechowywano w temperaturze -80°C do analizy histopatologicznej (Wang i in., 2008,Hsu i in., 2009,Nie i in., 2015).
Pomiar parametrów biochemicznych surowicy
Uszkodzenie wątroby oceniano poprzez oszacowanieaktywności enzymatycznejALT i AST w surowicy przy użyciu odpowiednich zestawów dostępnych na rynku, zgodnie z instrukcjami dotyczącymi zestawów (Nanjing, prowincja Jiangsu, Chiny). Aktywność enzymatyczną wyrażono w jednostkach na litr (U/l).
Pomiar MDA, SOD, GSH i GSH-Pxw homogenatach wątroby
Tkanki wątroby homogenizowano zimną solą fizjologiczną w stosunku 1:9 (wag./obj. wątroba:sól fizjologiczna). Homogenaty odwirowano (2500 xgprzez 10 minut), aby zebrać supernatanty do kolejnych oznaczeń. Uszkodzenie wątroby oceniano na podstawie wątrobowych pomiarów stężenia MDA i GSH oraz SOD i GSH-Pxdziałalność. Wszystko to oznaczono zgodnie z instrukcjami zawartymi w zestawie (Nanjing, prowincja Jiangsu, Chiny). Wyniki dla MDA i GSH wyrażono w nmolach na mg białka (nmol/mg prot), a aktywności SOD i GSH-Pxwyrażono jako U na mg białka (U/mg prot).
Analiza histopatologiczna
Porcje świeżo uzyskanej wątroby utrwalono w 10% buforzeparaformaldehydroztwór fosforanu. Próbkę następnie zatopiono w parafinie, pocięto na skrawki o wielkości 3–5 µm i wybarwionohematoksylinaIeozyna(H&E) zgodnie ze standardową procedurą i ostatecznie przeanalizowane przezmikroskopia świetlna(Tian i in., 2012).
Analiza statystyczna
Wyniki wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (SD). Wyniki analizowano za pomocą programu statystycznego SPSS Statistics w wersji 19.0. Dane poddano analizie wariancji (ANOVA,p< 0,05), a następnie test Dunnetta i test T3 Dunnetta w celu określenia istotnych statystycznie różnic pomiędzy wartościami poszczególnych grup eksperymentalnych. Za istotną różnicę uznano poziomp< 0,05.
Wyniki i dyskusja
Składniki AEO
Po analizie GC/MS stwierdzono, że AEO zawiera 25 składników wyeluowanych w czasie od 10 do 35 minut i zidentyfikowano 21 składników stanowiących 84% olejku eterycznego (Tabela 1). Zawiera olejek lotnymonoterpenoidy(80,9%), seskwiterpenoidy (9,5%), nasycone nierozgałęzione węglowodory (4,86%) i różne acetyleny (4,86%). W porównaniu z innymi badaniami (Guo i in., 2004), w AEO znaleźliśmy obfite monoterpenoidy (80,90%). Wyniki wykazały, że najliczniejszym składnikiem AEO jest β-cytronellol (16,23%). Inne główne składniki AEO obejmują 1,8-cyneol (13,9%),kamfora(12,59%),linalool(11,33%), α-pinen (7,21%), β-pinen (3,99%),tymol(3,22%) imircen(2,02%). Różnice w składzie chemicznym mogą być związane z warunkami środowiskowymi, na jakie narażona była roślina, takimi jak woda mineralna, światło słoneczne, etap rozwoju iodżywianie.
-
Czysty olejek Saposhnikovia divaricata do produkcji świec i mydła hurtowy olejek eteryczny z dyfuzorem nowość do dyfuzorów z palnikiem trzcinowym
2.1. Przygotowanie SDE
Kłącza SD zakupiono w postaci suszu od Hanherb Co. (Guri, Korea). Materiały roślinne zostały potwierdzone taksonomicznie przez dr Go-Ya Choi z Koreańskiego Instytutu Medycyny Orientalnej (KIOM). Okaz bonu (numer 2014 SDE-6) został zdeponowany w Koreańskim Zielniku Standardowych Zasobów Ziołowych. Wysuszone kłącza SD (320 g) ekstrahowano dwukrotnie 70% etanolem (w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny), a następnie ekstrakt zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Odwar przesączono, liofilizowano i przechowywano w temperaturze 4°C. Wydajność wysuszonego ekstraktu z surowych materiałów wyjściowych wyniosła 48,13% (wag.).
2.2. Ilościowa analiza wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC).
Analizę chromatograficzną przeprowadzono za pomocą systemu HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) i detektora z matrycą fotodiodową. Do analizy HPLC SDE,OWzorzec -glukozylocymifuginy zakupiono od Koreańskiego Instytutu Promocji Przemysłu Medycyny Tradycyjnej (Gyeongsan, Korea), orazsek-O-glukozylohamaudol i 4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowizamminol wyizolowano w naszym laboratorium i zidentyfikowano za pomocą analiz spektralnych, głównie NMR i MS.
Próbki SDE (0,1 mg) rozpuszczono w 70% etanolu (10 ml). Rozdział chromatograficzny przeprowadzono na kolumnie XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Faza ruchoma składała się z acetonitrylu (A) i 0,1% kwasu octowego w wodzie (B) przy szybkości przepływu 1,0 ml/min. Zastosowano wieloetapowy program gradientowy w następujący sposób: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min) ). Długość fali detekcji skanowano przy 210–400 nm i rejestrowano przy 254 nm. Objętość wtrysku wynosiła 10,0μL. Przygotowano roztwory wzorcowe do oznaczania trzech chromonów o końcowym stężeniu 7,781 mg/ml (pierwotnieO-glukozylocimifugina), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowizamminol) i 31,125 mg/ml (sek-O-glukozylohamaudol) w metanolu i utrzymywano w temperaturze 4°C.
2.3. Ocena działania przeciwzapalnegoIn vitro
2.3.1. Hodowla komórkowa i obróbka próbek
Komórki RAW 264.7 uzyskano z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) i hodowano w pożywce DMEM zawierającej 1% antybiotyków i 5,5% FBS. Komórki inkubowano w wilgotnej atmosferze 5% CO2 w temperaturze 37°C. W celu stymulacji komórek pożywkę zastąpiono świeżą pożywką DMEM i lipopolisacharydem (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) w temperaturze 1μg/ml dodano w obecności lub przy braku SDE (200 lub 400μg/ml) przez dodatkowe 24 godziny.
2.3.2. Oznaczanie tlenku azotu (NO), prostaglandyny E2 (PGE2), czynnika martwicy nowotworu-α(TNF-α) i produkcja interleukiny-6 (IL-6).
Komórki traktowano SDE i stymulowano LPS przez 24 godziny. Wytwarzanie NO analizowano poprzez pomiar azotynów przy użyciu odczynnika Griessa, zgodnie z wcześniejszym badaniem [12] Wydzielanie cytokin zapalnych PGE2, TNF-αi IL-6 oznaczono przy użyciu zestawu ELISA (systemy badawczo-rozwojowe) zgodnie z instrukcjami producenta. Wpływ SDE na produkcję NO i cytokin określono przy 540 nm lub 450 nm przy użyciu Wallac EnVision™czytnik mikropłytek (PerkinElmer).
2.4. Ocena działania przeciw chorobie zwyrodnieniowej stawówW Vivo
2.4.1. Zwierzęta
Samce szczurów Sprague-Dawley (w wieku 7 tygodni) zakupiono od Samtako Inc. (Osan, Korea) i trzymano w kontrolowanych warunkach z 12-godzinnym cyklem światło/ciemność w temperaturze°C i% wilgotność. Szczury otrzymywały karmę laboratoryjną i wodędowolnie. Wszystkie procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Narodowego Instytutu Zdrowia (NIH) i zatwierdzono przez Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu w Daejeon (Daejeon, Republika Korei).
2.4.2. Indukcja OA za pomocą MIA u szczurów
Zwierzęta randomizowano i przydzielono do grup terapeutycznych przed rozpoczęciem badania (na grupę). Roztwór MIA (3 mg/50μL 0,9% soli fizjologicznej) wstrzyknięto bezpośrednio do przestrzeni stawowej prawego kolana w znieczuleniu wywołanym mieszaniną ketaminy i ksylazyny. Szczury podzielono losowo na cztery grupy: (1) grupa otrzymująca sól fizjologiczną bez wstrzyknięć MIA, (2) grupa otrzymująca MIA z wstrzyknięciem MIA, (3) grupa leczona SDE (200 mg/kg) z wstrzyknięciem MIA oraz (4) ) grupa leczona indometacyną (IM-) (2 mg/kg) z zastrzykiem MIA. Szczurom podawano doustnie SDE i IM na 1 tydzień przed wstrzyknięciem MIA przez 4 tygodnie. Dawki SDE i IM stosowane w tym badaniu opierały się na dawkach stosowanych w poprzednich badaniach [10,13,14].
2.4.3. Pomiary rozkładu obciążenia tylnej łapy
Po wywołaniu OA pierwotna równowaga w obciążaniu tylnych łap została zakłócona. Do oceny zmian w tolerancji obciążenia wykorzystano tester niezdolności do pracy (Linton instrumentation, Norfolk, Wielka Brytania). Szczury ostrożnie umieszczono w komorze pomiarowej. Siłę nośną wywieraną przez kończynę tylną uśredniano w okresie 3 sekund. Stosunek rozkładu masy obliczono za pomocą następującego równania: [waga na prawej tylnej kończynie/(masa na prawej tylnej kończynie + masa na lewej tylnej kończynie)] × 100 [15].
2.4.4. Pomiary poziomu cytokin w surowicy
Próbki krwi wirowano przy 1500 g przez 10 minut w temperaturze 4°C; następnie zebrano surowicę i przechowywano w temperaturze -70°C aż do użycia. Poziomy IL-1β, IL-6, TNF-αi PGE2 w surowicy mierzono przy użyciu zestawów ELISA firmy R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) zgodnie z instrukcjami producenta.
2.4.5. Ilościowa analiza RT-PCR w czasie rzeczywistym
Całkowity RNA ekstrahowano z tkanki stawu kolanowego przy użyciu odczynnika TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA i amplifikowano metodą PCR przy użyciu zestawu TM One Step RT PCR z SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, Nowy Jork, USA). Ilościową PCR w czasie rzeczywistym przeprowadzono przy użyciu systemu Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekwencje starterów i sekwencję sondy przedstawiono w tabeli1. Porcje próbki cDNA i równe ilości cDNA GAPDH amplifikowano za pomocą głównej mieszaniny TaqMan® Universal PCR zawierającej polimerazę DNA zgodnie z instrukcjami producenta (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Warunki PCR wynosiły 2 min w 50°C, 10 min w 94°C, 15 s w 95°C i 1 min w 60°C przez 40 cykli. Stężenie docelowego genu określono metodą porównawczą Ct (liczba cykli progowych w punkcie przecięcia pomiędzy wykresem amplifikacji a progiem), zgodnie z instrukcjami producenta.
