Czysty olejek Saposhnikovia divaricata do produkcji świec i mydła, hurtowy olejek eteryczny do dyfuzorów i kominków trzcinowych

krótki opis:

 

2.1. Przygotowanie SDE

Kłącza SD zakupiono w postaci suszonego ziela od firmy Hanherb Co. (Guri, Korea). Materiał roślinny został potwierdzony taksonomicznie przez dr Go-Ya Choi z Koreańskiego Instytutu Medycyny Orientalnej (KIOM). Okaz (numer 2014 SDE-6) został zdeponowany w Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Suszone kłącza SD (320 g) ekstrahowano dwukrotnie 70% etanolem (z dwugodzinnym wrzeniem), a następnie ekstrakt zagęszczono pod zmniejszonym ciśnieniem. Wywar przefiltrowano, liofilizowano i przechowywano w temperaturze 4°C. Wydajność suszonego ekstraktu z surowych materiałów wyjściowych wyniosła 48,13% (w/w).

 

2.2. Analiza ilościowa metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC)

Analizę chromatograficzną przeprowadzono za pomocą systemu HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) i detektora z matrycą fotodiodową. Do analizy HPLC SDE,O-standard glukozylocimifuginy zakupiono w Koreańskim Instytucie Promocji Przemysłu Medycyny Tradycyjnej (Gyeongsan, Korea) isek-O-glukozylohamaudol i 4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowisaminol wyizolowano w naszym laboratorium i zidentyfikowano za pomocą analiz spektralnych, głównie metodą NMR i MS.

Próbki SDE (0,1 mg) rozpuszczono w 70% etanolu (10 ml). Rozdział chromatograficzny przeprowadzono za pomocą kolumny XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Faza ruchoma składała się z acetonitrylu (A) i 0,1% roztworu kwasu octowego w wodzie (B) przy przepływie 1,0 ml/min. Zastosowano wielostopniowy program gradientowy w następujący sposób: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min). Długość fali detekcji skanowano przy 210–400 nm i rejestrowano przy 254 nm. Objętość wtrysku wynosiła 10,0μL. Przygotowano roztwory standardowe do oznaczania trzech kromonów o stężeniu końcowym 7,781 mg/ml (pierwotneO-glukozylocimifuginy), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowizaminolu) i 31,125 mg/ml (sek-O-glukozylohamaudol) w metanolu i przechowywano w temperaturze 4°C.

2.3 Ocena działania przeciwzapalnegoIn vitro

2.3.1. Hodowla komórek i obróbka próbek

Komórki RAW 264.7 uzyskano z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) i hodowano w podłożu DMEM zawierającym 1% antybiotyków i 5,5% FBS. Komórki inkubowano w wilgotnej atmosferze 5% CO2 w temperaturze 37°C. W celu stymulacji komórek podłoże zastąpiono świeżym podłożem DMEM i lipopolisacharydem (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) w temperaturze 1°C.μg/ml dodawano w obecności lub nieobecności SDE (200 lub 400μg/ml) przez kolejne 24 godz.

2.3.2. Oznaczanie tlenku azotu (NO), prostaglandyny E2 (PGE2), czynnika martwicy nowotworuα(TNF-α) i produkcja interleukiny-6 (IL-6)

Komórki poddano działaniu SDE i stymulowano LPS przez 24 godziny. Produkcję NO analizowano poprzez pomiar azotynu przy użyciu odczynnika Griessa zgodnie z wcześniejszymi badaniami [12]. Wydzielanie cytokin zapalnych PGE2, TNF-α, a IL-6 oznaczono za pomocą zestawu ELISA (systemy R&D) zgodnie z instrukcją producenta. Wpływ SDE na produkcję NO i cytokin oznaczono przy długości fali 540 nm lub 450 nm za pomocą Wallac EnVision.™czytnik mikropłytek (PerkinElmer).

2.4. Ocena aktywności przeciw osteoartrozieNa żywo

2.4.1. Zwierzęta

Samce szczurów Sprague-Dawley (w wieku 7 tygodni) zakupiono od firmy Samtako Inc. (Osan, Korea) i trzymano w kontrolowanych warunkach z 12-godzinnym cyklem światła i ciemności.°C i% wilgotności. Szczurom podawano dietę laboratoryjną i wodędowolnieWszystkie procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Narodowych Instytutów Zdrowia (NIH) i zatwierdzono je przez Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i ich Wykorzystywania Uniwersytetu w Daejeon (Daejeon, Republika Korei).

2.4.2. Indukcja OA za pomocą MIA u szczurów

Przed rozpoczęciem badania zwierzęta zostały przydzielone losowo do grup leczonych (na grupę). Roztwór MIA (3 mg/50μL 0,9% soli fizjologicznej) wstrzyknięto bezpośrednio do przestrzeni dostawowej prawego kolana w znieczuleniu wywołanym mieszaniną ketaminy i ksylazyny. Szczury podzielono losowo na cztery grupy: (1) grupa soli fizjologicznej bez wstrzyknięcia MIA, (2) grupa MIA ze wstrzyknięciem MIA, (3) grupa leczona SDE (200 mg/kg) ze wstrzyknięciem MIA i (4) grupa leczona indometacyną (IM-) (2 mg/kg) ze wstrzyknięciem MIA. Szczurom podawano doustnie SDE i IM 1 tydzień przed wstrzyknięciem MIA przez 4 tygodnie. Dawkowanie SDE i IM stosowane w tym badaniu opierało się na dawkach stosowanych w poprzednich badaniach [10,13,14].

2.4.3. Pomiary rozkładu obciążenia tylnej łapy

Po indukcji OA pierwotna równowaga w zakresie zdolności do przenoszenia ciężaru przez tylne łapy została zaburzona. Do oceny zmian w tolerancji obciążenia zastosowano tester niedowładu (Linton Instrumentation, Norfolk, Wielka Brytania). Szczury ostrożnie umieszczono w komorze pomiarowej. Siłę obciążającą kończynę tylną uśredniono w ciągu 3 sekund. Współczynnik rozkładu ciężaru obliczono za pomocą następującego równania: [ciężar na prawej kończynie tylnej/(ciężar na prawej kończynie tylnej + ciężar na lewej kończynie tylnej)] × 100 [15].

2.4.4. Pomiary poziomu cytokin w surowicy

Próbki krwi wirowano przy 1500 g przez 10 min w temperaturze 4°C; następnie pobrano surowicę i przechowywano ją w temperaturze −70°C do momentu użycia. Stężenia IL-1β, IL-6, TNF-αi PGE2 w surowicy mierzono przy użyciu zestawów ELISA firmy R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) zgodnie z instrukcją producenta.

2.4.5. Analiza ilościowa RT-PCR w czasie rzeczywistym

Całkowity RNA wyekstrahowano z tkanki stawu kolanowego za pomocą odczynnika TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA i amplifikacji metodą PCR za pomocą zestawu TM One Step RT PCR z zielonym barwnikiem SYBR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Ilościową reakcję PCR w czasie rzeczywistym przeprowadzono za pomocą systemu Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekwencje starterów i sekwencję sond przedstawiono w tabeli.1Aliquoty próbki cDNA i równą ilość cDNA GAPDH amplifikowano za pomocą uniwersalnej mieszaniny głównej PCR TaqMan® zawierającej polimerazę DNA zgodnie z instrukcją producenta (Applied Biosystems, Foster, Kalifornia, USA). Warunki PCR wynosiły 2 minuty w temperaturze 50°C, 10 minut w temperaturze 94°C, 15 sekund w temperaturze 95°C i 1 minutę w temperaturze 60°C przez 40 cykli. Stężenie genu docelowego określono metodą porównawczą Ct (liczba cykli progowych w punkcie przecięcia między wykresem amplifikacji a progiem), zgodnie z instrukcją producenta.

Cena FOB:0,5–9999 USD/sztuka

Min. ilość zamówienia:100 sztuk

Możliwość zaopatrzenia:10000 sztuk miesięcznie