Czysty olejek Saposhnikovia divaricata do produkcji świec i mydła hurtowy olejek eteryczny z dyfuzorem nowość do dyfuzorów z palnikiem trzcinowym

krótki opis:

 

2.1. Przygotowanie SDE

Kłącza SD zakupiono w postaci suszu od Hanherb Co. (Guri, Korea). Materiały roślinne zostały potwierdzone taksonomicznie przez dr Go-Ya Choi z Koreańskiego Instytutu Medycyny Orientalnej (KIOM). Okaz bonu (numer 2014 SDE-6) został zdeponowany w Koreańskim Zielniku Standardowych Zasobów Ziołowych. Wysuszone kłącza SD (320 g) ekstrahowano dwukrotnie 70% etanolem (w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny), a następnie ekstrakt zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Odwar przesączono, liofilizowano i przechowywano w temperaturze 4°C. Wydajność wysuszonego ekstraktu z surowych materiałów wyjściowych wyniosła 48,13% (wag.).

 

2.2. Ilościowa analiza wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC).

Analizę chromatograficzną przeprowadzono za pomocą systemu HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) i detektora z matrycą fotodiodową. Do analizy HPLC SDE,OWzorzec -glukozylocymifuginy zakupiono od Koreańskiego Instytutu Promocji Przemysłu Medycyny Tradycyjnej (Gyeongsan, Korea), orazsek-O-glukozylohamaudol i 4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowizamminol wyizolowano w naszym laboratorium i zidentyfikowano za pomocą analiz spektralnych, głównie NMR i MS.

Próbki SDE (0,1 mg) rozpuszczono w 70% etanolu (10 ml). Rozdział chromatograficzny przeprowadzono na kolumnie XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Faza ruchoma składała się z acetonitrylu (A) i 0,1% kwasu octowego w wodzie (B) przy szybkości przepływu 1,0 ml/min. Zastosowano wieloetapowy program gradientowy w następujący sposób: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min) ). Długość fali detekcji skanowano przy 210–400 nm i rejestrowano przy 254 nm. Objętość wtrysku wynosiła 10,0μL. Przygotowano roztwory wzorcowe do oznaczania trzech chromonów o końcowym stężeniu 7,781 mg/ml (pierwotnieO-glukozylocimifugina), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozylo-5-O-metylowizamminol) i 31,125 mg/ml (sek-O-glukozylohamaudol) w metanolu i utrzymywano w temperaturze 4°C.

2.3. Ocena działania przeciwzapalnegoIn vitro

2.3.1. Hodowla komórkowa i obróbka próbek

Komórki RAW 264.7 uzyskano z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) i hodowano w pożywce DMEM zawierającej 1% antybiotyków i 5,5% FBS. Komórki inkubowano w wilgotnej atmosferze 5% CO2 w temperaturze 37°C. W celu stymulacji komórek pożywkę zastąpiono świeżą pożywką DMEM i lipopolisacharydem (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) w temperaturze 1μg/ml dodano w obecności lub przy braku SDE (200 lub 400μg/ml) przez dodatkowe 24 godziny.

2.3.2. Oznaczanie tlenku azotu (NO), prostaglandyny E2 (PGE2), czynnika martwicy nowotworu-α(TNF-α) i produkcja interleukiny-6 (IL-6).

Komórki traktowano SDE i stymulowano LPS przez 24 godziny. Wytwarzanie NO analizowano poprzez pomiar azotynów przy użyciu odczynnika Griessa, zgodnie z wcześniejszym badaniem [12] Wydzielanie cytokin zapalnych PGE2, TNF-αi IL-6 oznaczono przy użyciu zestawu ELISA (systemy badawczo-rozwojowe) zgodnie z instrukcjami producenta. Wpływ SDE na produkcję NO i cytokin określono przy 540 nm lub 450 nm przy użyciu Wallac EnVision™czytnik mikropłytek (PerkinElmer).

2.4. Ocena działania przeciw chorobie zwyrodnieniowej stawówW Vivo

2.4.1. Zwierzęta

Samce szczurów Sprague-Dawley (w wieku 7 tygodni) zakupiono od Samtako Inc. (Osan, Korea) i trzymano w kontrolowanych warunkach z 12-godzinnym cyklem światło/ciemność w temperaturze°C i% wilgotność. Szczury otrzymywały karmę laboratoryjną i wodędowolnie. Wszystkie procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Narodowego Instytutu Zdrowia (NIH) i zatwierdzono przez Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu w Daejeon (Daejeon, Republika Korei).

2.4.2. Indukcja OA za pomocą MIA u szczurów

Zwierzęta randomizowano i przydzielono do grup terapeutycznych przed rozpoczęciem badania (na grupę). Roztwór MIA (3 mg/50μL 0,9% soli fizjologicznej) wstrzyknięto bezpośrednio do przestrzeni stawowej prawego kolana w znieczuleniu wywołanym mieszaniną ketaminy i ksylazyny. Szczury podzielono losowo na cztery grupy: (1) grupa otrzymująca sól fizjologiczną bez wstrzyknięć MIA, (2) grupa otrzymująca MIA z wstrzyknięciem MIA, (3) grupa leczona SDE (200 mg/kg) z wstrzyknięciem MIA oraz (4) ) grupa leczona indometacyną (IM-) (2 mg/kg) z zastrzykiem MIA. Szczurom podawano doustnie SDE i IM na 1 tydzień przed wstrzyknięciem MIA przez 4 tygodnie. Dawki SDE i IM stosowane w tym badaniu opierały się na dawkach stosowanych w poprzednich badaniach [10,13,14].

2.4.3. Pomiary rozkładu obciążenia tylnej łapy

Po wywołaniu OA pierwotna równowaga w obciążaniu tylnych łap została zakłócona. Do oceny zmian w tolerancji obciążenia wykorzystano tester niezdolności do pracy (Linton instrumentation, Norfolk, Wielka Brytania). Szczury ostrożnie umieszczono w komorze pomiarowej. Siłę nośną wywieraną przez kończynę tylną uśredniano w okresie 3 sekund. Stosunek rozkładu masy obliczono za pomocą następującego równania: [waga na prawej tylnej kończynie/(masa na prawej tylnej kończynie + masa na lewej tylnej kończynie)] × 100 [15].

2.4.4. Pomiary poziomu cytokin w surowicy

Próbki krwi wirowano przy 1500 g przez 10 minut w temperaturze 4°C; następnie zebrano surowicę i przechowywano w temperaturze -70°C aż do użycia. Poziomy IL-1β, IL-6, TNF-αi PGE2 w surowicy mierzono przy użyciu zestawów ELISA firmy R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) zgodnie z instrukcjami producenta.

2.4.5. Ilościowa analiza RT-PCR w czasie rzeczywistym

Całkowity RNA ekstrahowano z tkanki stawu kolanowego przy użyciu odczynnika TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA i amplifikowano metodą PCR przy użyciu zestawu TM One Step RT PCR z SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, Nowy Jork, USA). Ilościową PCR w czasie rzeczywistym przeprowadzono przy użyciu systemu Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekwencje starterów i sekwencję sondy przedstawiono w tabeli1. Porcje próbki cDNA i równe ilości cDNA GAPDH amplifikowano za pomocą głównej mieszaniny TaqMan® Universal PCR zawierającej polimerazę DNA zgodnie z instrukcjami producenta (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Warunki PCR wynosiły 2 min w 50°C, 10 min w 94°C, 15 s w 95°C i 1 min w 60°C przez 40 cykli. Stężenie docelowego genu określono metodą porównawczą Ct (liczba cykli progowych w punkcie przecięcia pomiędzy wykresem amplifikacji a progiem), zgodnie z instrukcjami producenta.

Cena FOB:0,5–9 999 USD za sztukę

Min. ilość zamówienia:100 sztuk/sztuk

Możliwość zasilania:10000 sztuk / sztuk miesięcznie